【產(chǎn)品名稱】
通用名：豬藍(lán)耳病毒IgG抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (ELISA)
 
【包裝規(guī)格】 96T/盒
 
【預(yù)期用途】 
本試劑盒用于檢測豬血清中豬藍(lán)耳病毒抗體。評估豬場豬藍(lán)耳苗免疫狀況，感染豬的血清學(xué)診斷。
 
【原    理】
本試劑盒系由預(yù)包被豬藍(lán)耳病毒（PRRSV）GP5+GP6重組蛋白的微孔板和酶標(biāo)記二抗及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清或血漿中豬藍(lán)耳病毒特異性抗體。實驗時，在包被板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有豬藍(lán)耳病毒的特異性抗體，則將與包被板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與包被板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有特異性抗體。
 
【試劑盒組成】 
1. 豬藍(lán)耳病毒抗原預(yù)包被微孔板條 96T×1 
2. 酶標(biāo)記物  (紅蓋) 11ml×1 
3. 樣品稀釋液  (黃蓋) 25ml×1 
4. 20X濃縮洗滌液  (透明蓋) 20ml×1 
5. 底物液A  (白蓋) 6ml×1 
6. 底物液B  (黑蓋)  6ml×1 
7. 終止液  (黃蓋)  6ml×1 
8. 陽性對照 (紅蓋，已滅活) 0.5ml×1 
9. 陰性對照 (綠蓋，已滅活) 0.5ml×1 
10. 蓋板膜 1張 
11. 自封袋 1個 
12. 說明書 1份 
    
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【樣品制備】  取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品短期可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
 
【樣品稀釋】  用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右），并搖動使沉淀的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

【試驗操作方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量包被微孔板條，設(shè)空白、陰性及陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照血清100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣本100μl；空白對照孔不加。
4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A450）。
 
【結(jié)果判定】
定義：N=陰性對照孔平均A值；P=陽性對照孔平均A值；S=樣品孔A值；S/P=樣品孔A值/陽性對照孔平均A值。
1.正常情況下，N≤0.10，P≥0.50。
2.S/P≥0.18時判為陽性，S/P＜0.15時判為陰性，0.15≤S/P＜0.18時判為可疑。
當(dāng)本實驗結(jié)果為陰性時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應(yīng)疫苗。
 
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測豬藍(lán)耳病毒IgG抗體，不能區(qū)別疫苗免疫和野毒感染。
 
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存(包被板開封后請于2～8℃避光保存，使用